Hepatitis E virus in liver and bile samples from slaughtered pigs of Brazil

The objective of this study was to detect and identify hepatitis E virus (HEV) strains in liver and bile samples from slaughtered pigs in the state of Paraná, Brazil. Liver and bile samples were collected from 118 asymptomatic adult pigs at a slaughterhouse in a major Brazilian pork production area. The samples were assayed using a nested reverse transcription-polymerase chain reaction protocol with primer sets targeting open reading frames (ORF)1 and 2 of the HEV genome. HEV RNA was detected in two (1.7%) liver samples and one (0.84%) bile sample using both primers sets. The HEV strains were classified as genotype 3b on the basis of their nucleotide sequences. These data suggest that healthy pigs may be a source of HEV infection for consumers of pig liver and slaughterhouse workers in Brazil.

Bovine coronavirus detection in a collection of diarrheic stool samples positive for group a bovine rotavirus

Neonatal diarrhea is an important cause of economic losses for cattle farmers. The main viral etiologies of enteric diseases are group A rotaviruses (GARV) and the bovine coronavirus (BCoV). Although both viruses infect calves of the same age, the occurrence of mixed infections is still under studied. The present study describes the co-infection of BCoV and GARV in stool samples. Forty-four diarrheic fecal samples from calves up to 60 days old that had previously tested positive for GARV by SS-PAGE were analyzed using semi-nested PCR for BCoV. A product with 251 bp of the BCoV nucleoprotein gene was amplified in 15.9 percent (7/44) of the samples, demonstrating that co-infection is not an unusual event. These results reinforce the need for testing for both GARV and BCoV, even in fecal samples that previously tested positive for one virus.

A diarreia neonatal é uma importante causa de perdas econômicas para a criação de bovinos. Os principais agentes etiológicos virais das doenças entéricas são o rotavírus bovino grupo A (GARV) e o coronavírus bovino (BCoV). Embora ambos os vírus infectem bezerros na mesma faixa etária, infecções mistas ainda são pouco estudadas. O presente trabalho descreve a identificação do BCoV em amostras de fezes positivas para o GARV, caracterizando a ocorrência de infecções mistas. Quarenta e quatro amostras de fezes diarreicas de bezerros com até 60 dias de idade, previamente identificadas como positivas para o GARV bovino por meio da técnica de SS-PAGE, foram avaliadas quanto a presença do BCoV pela técnica de semi-nested PCR. Um produto com 251 pb do gene da nucleoproteína do BCoV foi amplificado em 15,9 por cento (7/44) das amostras de fezes demonstrando que a co-infecção não é um evento raro. Esse resultado enfatizada a importância da realização simultânea do diagnóstico para esses dois importantes vírus entéricos de bezerros em surtos de diarreia neonatal tanto em rebanhos bovinos leiteiros quanto de corte.

Isolation in HRT-18 cells and molecular analysis of a BCoV strain from diarrheic feces of naturally infected calves

Bovine coronavirus (BCoV) may cause acute diarrhea in newborn calves, leading to significant economic losses for cattle farmers. There are several diagnostic techniques used to detect BCoV in calf fecal samples, but virus isolation still has advantages for antigenic and genomic characterization. This study describes the isolation in HRT-18 cells and molecular characterization of Brazilian BCoV wild-type strains. Three fecal samples from diarrheic 30 day-old calves were inoculated in HRT-18 cell monolayers, which were then evaluated for HA titers and tested using semi-nested PCR followed by RFLP and sequencing. Two samples were successfully isolated and presented HA titers of 16 and 32 units per 25 mL. The results were confirmed using semi-nested PCR and RFLP. Molecular analyses identified a cell culture-adapted strain and a wild-type strain that were genetically similar (99 percent) to each other, but more distinct than BCoV strains circulating in other countries, even in the conserved N gene.

O coronavírus bovino (BCoV) pode causar diarreia aguda em bezerros recém-nascidos, ocasionando consideráveis perdas econômicas para a pecuária bovina. Várias técnicas de diagnóstico podem ser empregadas na detecção do BCoV a partir de amostras fecais de bezerros. Porém, o isolamento do BCoV em cultivo celular apresenta a vantagem de possibilitar a caracterização antigênica e molecular da estirpe viral. O presente estudo descreve o isolamento em células HRT-18, e a caracterização molecular de estirpes brasileiras do BCoV. Três amostras de fezes diarreicas de bezerros com 30 dias de idade foram inoculadas em culturas de células HRT-18. Os isolados foram avaliados por hemaglutinação (HA) e por uma semi-nested PCR seguida de RFLP e sequenciamento. Duas amostras foram isoladas e a confirmação foi verificada na semi-nested PCR e também RFLP. Na HA os títulos foram de 16 e 32 unidades por 25 mL. Análises moleculares identificam a estirpe adaptada em cultura celular e uma estirpe selvagem, como estirpes de BCoV semelhantes (99 por cento) entre si, mas distintas das circulantes em outros países, mesmo em um gene de uma proteína conservada (gene N).

An outbreak of winter dysentery caused by bovine coronavirus in a high-production dairy cattle herd from a tropical country

Bovine coronavirus (BCoV) is a known cause of winter dysentery (WD) in adult cattle. The morbidity of the disease is high, that results in a significant decrease in milk production and consequently, economic losses. In the present study, we report on a classical outbreak of WD that affected a high-production Holstein dairy herd raised in a tropical country. The lactating batch included 154 cows, and 138 (90 percent) presented diarrhea in a short (nine days) period of time. Three (2 percent) cows died. The other batches of animals did not become ill. The evolution of the disease in the herd, including the clinical signs and epidemiological features, strongly suggested a WD case. Semi-nested PCR and RFLP confirmed that BCoV was the cause of the infection. Samples tested negative for all other enteric pathogens. This case report highlights the importance of BCoV in WD even in tropical countries such as Brazil.

O coronavirus bovino (BCoV) pode causar a diarreia de inverno (WD - Winter Dysentery) ao infectar bovinos adultos, particularmente em regiões de clima temperado ou frio. A morbidade da doença é alta, resultando em queda na produção de leite e, consequentemente, perdas econômicas. No presente estudo, é descrito um surto clássico de WD acometendo um rebanho de bovinos leiteiros da raça Holandesa PB, de alta produção, proveniente do estado do Paraná. O lote afetado era composto por 154 vacas em lactação, sendo que 138 (90 por cento) apresentaram diarreia em um curto (nove dias) período de tempo e 3 (2 por cento) vacas morreram em consequência da diarreia, desidratação e desequilíbrio eletrolítico. As outras categorias de animais do rebanho (bezerras, novilhas e vacas secas) não apresentaram sinal clínico. A evolução da doença clínica, assim como a epidemiologia da infecção sugeriu um quadro clássico de WD. O diagnóstico foi realizado por meio da identificação do BCoV, pela técnica de semi-nested PCR e confirmação por RFLP, em amostra fecal de uma vaca que veio a óbito. A presença de outros patógenos entéricos também foi avaliada e apresentou resultados negativos. O surto de WD descrito na região sul do Brasil alerta para a possibilidade da ocorrência dessa virose também em países situados em regiões de clima tropical.

Frequency of group a rotavirus in piglet stool samples from non-vaccinated Brazilian pig herds

Neonatal diarrhea is one of the main causes of morbidity and mortality in piglets, and it leads to significant economic losses for pig farmers worldwide. The aim of this study was to determine the frequency of diagnosis, age group, and association of group A rotavirus (GARV) infection with diarrhea in piglets from pig herds in two (south and center-west)Brazilian geographical regions. The frequency of GARV diagnosis was evaluated between 2004 and 2007, using SS-PAGE on 681 fecal samples (428 diarrheic and 253 with normal consistency) from 1-4 week-old piglets. The animals were selected from 130 pig herds and 80 counties in the states of Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná, Mato Grosso do Sul, and Mato Grosso, Brazil. None of the herds were vaccinated against porcine GARV. Rotaviruses with the typical GARV electrophoretic pattern was identified in 193 (28.3 percent) fecal samples, and of these, 157 (81.3 percent) were diarrheic (p=0.001).Porcine GARV infection was identified in animals from all age groups evaluated, and the highest infection rate (54.7 percent; p=0.001) occurred in diarrheic piglets between 21 and 28 days of age. Diarrheic feces from 1-7 day-old piglets also had a high rate of rotavirus presence (32.3 percent), suggesting a failure in passive immunity. The high rate of porcine GARV infection in all geographical regions studied demonstrates the involvement of rotavirus in the etiology of neonatal diarrhea in Brazilian pig herds. This study highlights the importance of GARV infection for pig raising and the need of control and prophylactic measures for porcine rotavirus infection, including vaccination in the main areas of pork production in Brazil.

A diarréia neonatal é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em leitões, ocasionando consideráveis prejuízos econômicos à suinocultura em todo o mundo. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência de diagnóstico, distribuição etária e a associação com diarreia da infecção por rotavírus grupo A (GARV) em leitões de granjas situadas em duas (sul e centro-oeste) regiões geográficas brasileiras. A frequência de diagnóstico do GARV foi avaliada no período de 2004 a 2007, pela técnica de SS-PAGE, em 681 amostras fecais (428 diarréicas e 253 com consistência normal) de leitões de 1 a 4 semanas de idade. Os animais eram provenientes de 130 granjas, localizadas em 80 municípios dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná, Mato Grosso do Sul e Mato Grosso. Nenhum dos rebanhos realizava vacinação contra o GARV suíno. Rotavírus suíno com perfil eletroforético característico do grupo A foi detectado em 193 (28,3 por cento) amostras, das quais 157 (81,3 por cento) diarreicas (p=0,001). A infecção foi identificada em animais de todas as faixas etárias avaliadas e a maior frequência (54,7 por cento; p=0,001) de diagnóstico ocorreu em leitões diarréicos com 21 a 28 dias de idade. A alta taxa (32,3 por cento) de diagnóstico do rotavírus em fezes diarreicas de leitões com 1 a 7 dias de vida sugere a necessidade da adoção de condutas que objetivem o incremento da imunidade passiva. A frequência de diagnóstico e a ampla distribuição das infecções pelo GARV, nos rebanhos das regiões geográficas avaliadas nesse estudo, ratificam a importância da rotavirose na etiologia dos episódios de diarreia de leitões no Brasil. Este resultado destaca também a importância do controle e medidas profiláticas na infecção por rotavírus suíno, incluindo a vacinação nas principais áreas de produção suína no Brasil.

Intestinal lesions in pigs affected with postweaning multisystemic wasting syndrome / Lesões entéricas em suínos afetados por síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos

Samples of mesenteric lymph nodes and intestines from 79 unthrifty 3- to 5-month-old postweaning pigs, confirmed as naturally affected with postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), were studied. Pigs originated from 12 farms in southern Brazil and were selected on the basis of clinical signs and/or gross lesions suggestive of enteric disorder. Lymphohistiocytic infiltrates of varying intensity were associated with anti-porcine circovirus type 2 (anti-PCV2) immunostaining (IS) in samples of intestines and mesenteric lymph nodes from all pigs. Although most findings were similar to those described in PCV2-associated enteritis, anti-PCV2 IS in association with depletion of the goblet cell mucin stores (24 pigs), diffuse ileal villous atrophy and fusion (18 pigs), and dilatation of the lymphatic vessels (11 pigs) combined or not with lymphangitis were also observed. PCV2 antigen was immunohistochemically demonstrated in the cytoplasm and nuclei from intralesional epithelial cells, histiocytes, and endothelial-like cells in intestinal tissues. Together these findings imply an association with PCV2. The presence of co-infections by Lawsonia intracellularis, Brachyspira spp., Mycobacterium spp., Salmonella spp., rotavirus, parvovirus, coronavirus and enteric calicivirus with PCV2 in the intestinal lesions was investigated.

Amostras de linfonodos mesentéricos e intestinos de 79 leitões desmamados refugos, entre 3 e 5 meses de idade e confirmados como naturalmente afetados pela síndrome multissistêmica do definhamento foram estudadas. Os suínos eram oriundos de 12 criações no sul do país e foram selecionados em função dos sinais clínicos e/ou lesões macroscópicas sugestivos de doença entérica. Infiltrados linfoistiocíticos de intensidades variáveis foram associados com marcação positiva anti-circovirus suíno tipo 2 (anti-PCV2) em amostras de intestinos e linfonodos mesentéricos de todos os 79 animais. Embora a maioria dos achados fossem semelhantes aos descritos em enterite associada com PCV2, marcação imuno-histoquímica anti-PCV2 foi associada com depleção de células caliciformes (24 suínos), atrofia e fusão de vilosidades do íleo (18 suínos) e dilatação de vasos linfáticos (11 suínos) combinada ou não com linfangite. Antígenos de PCV2 foram demonstrados por imuno-histoquímica no citoplasma e núcleo de células epiteliais intralesionais, histiócitos e células tipo endotelial em tecidos intestinais. Em conjunto, esses resultados sugerem que as lesões estavam associadas com PCV2. A presença de co-infecções por Lawsonia intracellularis, Brachyspira spp., Mycobacterium spp., Salmonella spp., rotavírus, parvovírus, coronavírus e calicivírus entérico com PCV2 nas lesões intestinais foi investigada.